内参蛋白
更新时间：2024-10-28 16:22:45
4183
内参蛋白一般是指由管家基因编码表达的蛋白，这些蛋白在各组织和细胞中的表达量相对恒定。
内参蛋白的作用主要是用来校正蛋白样品定量和上样过程中的误差，提高实验结果的准确性，同时作为WB实验的对照。
内参蛋白的选择
①根据实验样本的物种来源进行选择，对于哺乳动物的样本，通常选择GAPDH、β-actin、β-tubulin、Lamin B、Histone H3，植物样本常用actin、Rubisco。
②如果检测亚细胞定位的蛋白时，可选择对应细胞器定位的内参蛋白，更能体现内部参照的准确性。
③内参蛋白一般需要与目标蛋白分子量相差5KD以上
内参蛋白选择注意事项：
糖代谢和缺氧模型中会增加GAPDH在特定细胞和组织中的表达，因此不能用GAPDH做内参；细胞骨架相关研究、骨骼肌样本不能用β-actin做内参，在脂肪组织和细胞中β-actin表达量较少；细胞毒性实验时不能用Lamin B做内参。
Histone H3在细胞核中表达相当稳定，缺氧模型一般可以用Tublin。在做多组织多细胞样本对比表达量时，最好选择GAPDH作为内参，GAPDH属于代谢类蛋白，在活组织中表达比较恒定。检测磷酸化蛋白或诱导后样本时，通常选择结构蛋白如β-actin或β-Tubulin。
内参蛋白参考表
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
42 | 全细胞 | |
37 | ||
β-tubulin | 55 | |
α-tubulin | 52 | |
Vinculin | 123 | |
α-Actinin | 103 | |
Cyclophilin B | 21 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
Histone H3 | 15 | 细胞核 |
HDAC1 | 65 | |
Lamin B1 | 68 | |
PCNA | 33 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
COX IV | 17 | 线粒体 |
VDAC1 | 31 | |
ATP5A | 60 | |
Tom20 | 17 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
Na+/K+-ATPase α1 | 100 | 胞膜 |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
Calnexin | 90 | 内质网 |
ERp57 | 55 | |
Calregulin | 48 | |
Endoplasmin | 92 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
GRASP55 | 47 | 高尔基体 |
GM130 | 130 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
CD9 | 25 | 外泌体（Exosome） |
CD81 | 26 | |
CD63 | 25 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
ATG12 | 15 | 自噬小体（Autophagosomes） |
LC3B | 14、16 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
CENPJ | 147 | 中心体（Centriole） |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
RAB11B | 28 | 内含体（Endosome） |
EEA1 | 162 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
Ribosomal Protein S3 | 30 | 核糖体（Ribosome） |
Ribosomal Protein S6 | 28 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
Catalase | 60 | 过氧化物酶体（Peroxisome） |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
LAMP1 | 120 | 溶酶体（Lysosome） |
LAMP2 | 100 | |
上样对照 | 分子量（kDa） | 蛋白定位 |
BMI1 | 37 | 细胞小体（CellularBoies） |
